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用 ? 途： 用于小鼠血清、血浆及相关液体样本中5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）的测定。
检测原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样中小鼠5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）的水平。向预先包被了小鼠5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）单克隆抗体的酶标孔中加入5-羟色胺1A型受体（5-HT1A），温育；温育后，加入生物素标记的5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与样中小鼠5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）的浓度呈正相关。试剂盒组成?

名 ?称96孔配置12孔×8条48孔配置12孔×4条
备 ?注 1标准（50ng/ml）0.5ml0.5ml稀释即用型?
2 ?酶标包被板1块1块已包被即用型?
3标准稀释液3ml3ml即用型?
4链霉亲和素-HRP6ml3ml即用型?
530x倍浓缩洗涤液20ml20ml蒸馏水稀释?
6生物素标记的抗5-羟色胺1A型受体（5-HT1A） 抗体2ml2ml即用型?
7显色剂A液6ml3ml即用型?
8显色剂B液6ml3ml即用型?
9终止液6ml3ml即用型
10说明书1份1份即用型
11封板膜2张2张不可反复使用
12密封袋1个1个即用型

需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片） 。
2. 洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
3. 超净工作台，生物安全柜，通风柜。
4. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl）.
5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl）.
6. 37℃恒温箱。
7. 低温离心机。
8. 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9. ?漩涡混合仪，低频振荡器等注意事项1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。
5． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
6. ? 所有样，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。
7. ?各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
8. ?每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准孔高浓度的OD值），请先用样稀释液稀释定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n）。
9. ?配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，好使用微量振荡器（使用低频率），如无微量振荡器，可在反应手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆动作，使加入孔中的反应液混匀。
10. ?实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用充分预热。
11. ?手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 样本要求
1．不能检测含NaN3的样，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不样，本说明书不做详细介绍）。?
操作程序1． 标准的稀释：（本试剂系统提供原倍标准支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
?25ng/ml（5号标准）120μl的原倍标准加入120μl的标准稀释液 12.5ng/ml（4号标准）120μl的5号标准加入120μl的标准稀释液 ? 6.25ng/ml（3号标准）120μl的4号标准加入120μl的标准稀释液 ?3.12ng/ml（2号标准）120μl的3号标准加入120μl的标准稀释液 ?1.56ng/ml（1号标准）120μl的2号标准加入120μl的标准稀释液
2． 根据待测样数量加上标准的数量决定所需的板条数。每个标准和空白孔建议做复孔。每个样根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加样：1）空白孔：（空白对照孔不加样，生物素标记的抗5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）标准孔:加入标准50μl，链霉亲和素-HRP50μl（标准中已事先整合好生物素标记抗体，故在操作时不加，只加链霉素-HRP）；3）样本反应孔：加入样本40μl，然后各加入抗5-羟色胺1A型受体（5-HT1A）抗体10μl、链霉亲和素-HRP（空白孔除外）50μl。盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
4． 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
6． 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7． 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8． 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。 结果判断1. ?每个标准和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴） 2.根据标准的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样的OD值在回归方程上计算出对应的样浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。3．手工绘制标准曲线。以标准浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 操作总结 准备试剂，样和标准 ? ? ? ? ?加入准备好的样和标准，生物素标记二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟。 ?洗板5次，加入显色液A、B,37℃显色10分钟 ? ? 加入TMB终止液 ?10分钟内酶标仪测OD值 ? ?计算待测样本因子含量试剂盒性能1. 准确性：标准线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9200。2. 灵敏度：小可检测浓度达，0.105ng/ml。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5 .回收率：70-110%.6.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。7. 有效期：6个月8. 检测范围： 48ng/ml -0.39ng/ml